有的细胞特别大或特别小，特别是一些原代细胞，还有的细胞成团无法计数。对于这种细胞，从预实验开始就会有所不同。预实验时，保持感染时细胞的汇合率达到30~40%，即使细胞没有预定的10000 个/孔的数目，正式实验的细胞汇合率应尽量控制在这个数量。对于成团的细胞，如胰岛细胞，胚胎干细胞等，应注意细胞团的数目和大小，以便以后的实验按比例放大。

Lentivirus可能对您的目的细胞有一定的毒性，请调整并降低感染的MOI值，并且在感染4 h、8 h、12 h后对细胞进行换液，用新鲜的完全培养液继续培养观察。

目的细胞中GFP荧光强度取决于病毒感染细胞的颗粒数、细胞本身的增殖状态、细胞类型以及观察时间等。一般来讲，目的细胞感染病毒颗粒数越多，细胞本身增殖越快，GFP荧光会较强。Lentivirus属于慢病毒，一般在增殖较快的细胞中病毒感染48~72h后，GFP基因表达才达到高峰。对于增殖较慢的细胞，GFP基因表达时间还会延长。

一般我们通过提高MOI值来提高病毒的转染效率，必要时可在培养液中加入Polybrene (4~10 µg/mL)来提高病毒的感染率。同时，目的细胞良好的生长状态是获得正常感染效率的保证。

常见细胞推荐的MOI

艾基提供的Lentiviral Vector Particle为VSVG膜蛋白包裹的，虽然与其他的膜蛋白相比，它能够感染的细胞种类大大增加，但是对不同的细胞和组织的感染性仍有差别。在使用Lentivirus之前请查阅相关文献，了解这种Lentivirus对目的细胞的亲嗜性，复感染指数（MOI值）以及在体内（in vivo）注射所需要的病毒量。如果没有相关文献支持，则需要检测病毒对目的细胞的亲嗜性。实际上即使有文献支持，但因为不同实验的细胞代数，个体差异，细胞状态的关系，细胞实际的MOI和文献报道的往往会有差异。因此，正式实验前一般会安排预实验，以了解细胞所需MOI以及病毒对细胞状态和传代的影响。1. 目的细胞感染预实验 说明：MOI值：感染复数或…

艾基提供的慢病毒载体属于“第二代”慢病毒载体，其基因组的3’ LTR的增强子功能发生了缺失，从而形成了所谓的“自灭活”（Self-inactivation，SIN），即该病毒基因组整合到细胞基因组后，不会产生新的子代病毒，也降低了对周围基因的意外激活，因此具有较好的安全性。但该病毒仍然具有可能的潜在的生物学危险，所以建议不要使用编码已知或可能会致癌的基因的假型病毒。除非已经完全公认某个基因肯定没有致癌性，否则均不建议采用假型病毒进行生物学实验，如有疑问，请与我们联系。使用时请参照如下所示进行实验：1. 病毒操作时请使用生物安全柜（BSL-2）。2. 病毒操作时请穿实验服，戴口罩和手套。3. 操作病毒时应小心，避免…

1. 收到病毒液后4℃保存(请于一周内用完)，如需长期保存则存放于-80℃。避免反复冻融，否则会降低病毒滴度，一般病毒可以存放于-80℃约6个月。6个月后使用，请重新检测病毒滴度。2. 艾基提供的Lentivirus溶于HBSS中 (pH7.4) 。病毒使用时，请将病毒从-80℃冰箱取出，冰浴融化，4℃存放。如有需要稀释病毒，则可加入适量的HBSS混匀使用，也可以用培养液进行稀释。3. “TU/mL”：Transducing Units，转导单位，表示可以感染并进入到目标细胞群中的病毒基因组数。艾基提供的慢病毒单位标识为TU/mL时，即每毫升慢病毒溶液中含有具有生物活性的慢病毒颗粒数。如：病毒滴度>1×10∧8 TU/mL，即每毫升病毒液中至少含有1×10∧8个具有…