采用硅胶柱纯化方式从细菌中提取高纯的DNA或RNA
iPure Bacterial DNA&RNA Kits 采用硅胶柱纯化方式,适合于从细菌培养液或其它样品中快速抽提高纯度的细菌DNA或RNA,操作者可以在60min完成多个样品的提取工作。
从革兰氏阳性菌中提取基因组DNA的实验例:
使用本试剂盒从从革兰氏阳性菌中提取基因组DNA,最终分别从白色念珠菌、金黄色葡萄球菌中纯化得到了高纯度基因组DNA,其电泳结果见图。
注:2%琼脂糖凝胶电泳图;M:DL 5000 Maker(TaKaRa);1.白色念珠菌菌基因组DNA;2.金黄色葡萄球菌基因组DNA
从革兰氏阴性菌中提取基因组DNA的实验例:
使用本试剂盒从革兰氏阴性菌中提取基因组DNA,最终分别从大肠杆菌、肺炎克雷伯菌中纯化得到了高纯度基因组DNA,其电泳结果见图。
注:2%琼脂糖凝胶电泳图;M:DL 5000 Maker(TaKaRa);1.大肠杆菌基因组DNA;2.肺炎克雷伯菌基因组DNA
iPure Bacteria DNA&RNA M.tuberculosis Kits(离心柱法)
结核分枝杆菌DNA&RNA提取试剂盒是一款专门为艰难裂解的细菌(如:葡萄球菌、粪肠球菌、结核分枝杆菌)而设计的纯化试剂,试剂盒中配有二氧化锆磁珠,通过磁珠5~10分钟的斡旋震荡,可以将较难裂解的细胞壁破坏,短暂离心后的液体通过溶菌酶的作用,能够得到高质量的DNA,用于后续的分子生物学分析,广泛适用于结核分枝杆菌的DNA诊断研究。
图中为重复20次提取分枝杆菌108,106,104CFU/ml,进行荧光定量PCR测试的结果
结核分枝杆菌
结核分枝杆菌(M.tuberculosis),俗称结核杆菌,是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官,但以肺结核为最多见。结核病至今仍为重要的传染病。据WHO报道,每年约有800万新病例发生,至少有300万人死于该病。我国建国前死亡率达200-300人/10万,居各种疾病死亡原因之首,建国后人民生活水平提高,卫生状态改善,特别是开展了群防群治,儿童普遍接种卡介苗,结核病的发病率和死亡率大为降低。但应注意,世界上有些地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫困等原因,发病率又有上升趋势。
细胞壁结构
杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高,约占干重的60%,特别是有大量分枝菌酸(mycolicacid)包围在肽聚糖层的外面,可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法,以5%石炭酸复红加温染色后可以染上,但用3%盐酸乙醇不易脱色。若再加用美蓝复染,则分枝杆菌呈红色,而其他细菌和背景中的物质为蓝色。 发现结核分枝杆菌在细胞壁外尚有一层荚膜。一般因制片时遭受破坏而不易看到。若在制备电镜标本固定前用明胶处理,可防止荚膜脱水收缩。在电镜下可看到菌体外有一层较厚的透明区,即荚膜,荚膜对结核分枝杆菌有一定的保护作用。
iPure Bacterial DNA&RNA Magic Beads Kits (磁珠法)
Magic beads Kit 是一款能够适用于大量样本提取的试剂盒,该试剂盒采用溶菌酶裂解细菌细胞壁,然后通过高浓度胍盐裂解细胞,通过高分散的硅羟基磁珠和细菌DNA结合,通过移动磁珠,洗涤蛋白,最终达到分离核酸的目的;平均每个样品的时间小于5分钟。