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文库定量标准品

货号:P104

规格:8次×3个重复

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产品介绍


        文库定量试剂盒包含了用于qPCR绝对定量的NGS文库扩增所需的所有试剂。为Illumina®及Ion TorrentTM平台测序文库提供了可靠的,基于qPCR的定量方案。试剂盒所提供的所有试剂都经过了严格的质量控制,最大程度上保证了不同批次间实验结果的可重复性。

 


试剂盒的工作原理

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        使用含有靶向接头序列、平台特异性的qPCR 引物和DNA标准品进行qPCR反应,将已知浓度DNA标准品的平均Cq值左图,生成标准曲线,将稀释文库的平均Cq值转换为浓度,从而算出每个文库的浓度。

 

        本品是针对Illumina®平台高通量测序文库浓度绝对定量而设计的。 不论以使用何种方式构建,只要文库末端包含Illumina® p5和p7芯片结合序列、长度不超过1 kb 且浓度不低于0.006 pM,都可以使用本品进行绝对定量。此外,本品还可用于检测实验环境中文库污染程度。

        p5:5'-AATGATACGGCGACCACCGA-3';p7:5'-CAAGCAGAAGACGGCATACGA-3'。

 

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图:qPCR文库定量与 2100\Qubit 检测结果的差异


        如图所示:NGS测序文库构建过程中,adaptoar 连接可能存在单端加入接头的情况,也有一些完全没有加上接头的片段存在,这使得上机前的定量时存在了误差的风险,导致混样不均,数据量少或者存在偏差,参差不齐;

        目前受检测平台的限制,Agilent Bioanalyzer 2100,Qubit(PicoGreen) 或者Nanodrop 都不能分清楚能否正确的加入测序接头,测出的结果都是实际DNA的浓度,而不是有效(含接头)DNA浓度。 q-PCR文库定量试剂,是通过与测序引物完全匹配的引物扩增检测,有效DNA的浓度,通过建立标准曲线,精确计算产物的浓度,然后进行混样测序,达到数据均匀的目的。


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