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蛋白纯化服务

    常用分离纯化手段包括:膜分离技术、沉淀分离技术、电泳分离技术、层析分离技术。其中膜分离技术与沉淀分离技术属于蛋白粗提取,电泳分离技术主要应用于检测分析。蛋白纯化目前主要选择层析分离技术,通常分为以下几种方法

纯化方法

原理

适用范围

凝胶过滤层

根据分子间的大小或者形状差异进行分离

根据生物活性物质与特异性配体间的特异性亲和力来达到分离目的

离子交换层析

根据蛋白质分子表面静电荷的差异进行分离

阳离子交换主要是改变pH,主要应用于等电点大于5的蛋白质;阴离子交换主要是改变盐浓度,适用于大部分蛋白质,除杂能力较强,对热源质、核酸、外毒素及电荷性有差别的蛋白效果显著。

疏水层

根据蛋白质与疏水吸附剂之间的疏水作用差异进行分离

适用范围广,原则上可用于所有蛋白质的纯化,适合于从大体积中提取低含量的目标蛋白,对DNA及小牛血清去除率较高

 

亲和层析

根据生物活性物质与特异性配体间的特异性亲和力来达到分离目的

适用于抗原抗体亲和纯化,以及一系列标签纯化

 

亲和纯化常用标签 



 常用类型有:HIS标签(镍柱纯化)、GST标签(谷胱甘肽)、Flag标签、MBP标签、Strep tag标签


比较项目

大小

纯化原理

特点

HIS Tag

一般为6-8个组氨酸组合

组氨酸残基上的咪唑基团可与层析介质中的金属离子螯合,再通过提高缓冲液中咪唑浓度进行竞争性洗脱达到纯化效果

标签小,纯化简单;

能与其他标签形成双标签;

能纯化可溶性/包涵体蛋白

GST Tag

26KD

利用GST融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和,通过GSH交换洗脱原理来进行纯化

可溶性标签,提高蛋白表达的可溶性;

不能应用于包涵体等需变形处理的纯化

Flag Tag

8个氨基酸

DYKDDDDK

琼脂糖上偶联有flag抗体,可采用竞争性洗脱或酸性洗脱

在真核表达系统中表达效率更高;

可以纯化有活性的融合蛋白,

 

MBP Tag

42.5 KD

 多糖树脂吸附

 

可以减少目标蛋白的降解,增加蛋白的表达量和稳定性,提高表达产物的水溶性,但标签较大,

对蛋白的结构和功能会有一定影响。

适用于包涵体的纯化

Strep Tag

8个氨基酸

WSHPQFEK

生物素(biotin)和抗生物素蛋白链菌素(streptavidin)之间的结合反应。

纯化流程温和能保持目标蛋白活性;

能进行变性条件下的纯化;

价格相对HIS Tag而言较高

 

 

服务类型


定制的蛋白纯化服务包括:

/无标签重组蛋白分离纯化,天然蛋白纯化分离

天然蛋白纯化服务

 

项目名称

纯化方案                                

天然大分子蛋白分离纯化

选用适当孔径的分子筛分离纯化,配合使用阴、阳离子吸附柱以及HLPC,鉴定并收取相应洗脱峰。

天然小分子蛋白分离纯化

多层级分离过滤配合分子筛去除大分子杂质,结合使用大孔树脂或反向树脂纯化小分子蛋白,经 HPLCMS鉴定纯化。

混合未知蛋白样品分离纯化

由卡梅德生物制定相应方案进行分离纯化,并经质谱鉴定、活性鉴定等多种方案确认分离产物。                       

 

重组蛋白纯化服务


项目名称

纯化方案

重组蛋白脱标签及分离纯化

商品化亲和纯化树脂,如Ni柱,GST-Beads等分离纯化带有6xHisGSTSUMOMBP融合蛋白,获得纯度90%以上融合蛋白

不含标签的重组蛋白纯化

抗体亲和纯化;也可选择类似于天然蛋白纯化方式,依项目而定

包涵体变性与复性纯化

根据蛋白质不同的性质,可以选择尿素、盐酸胍、去垢剂、极端pH等,以保证最大程度获得单体状态的变性蛋白


 

项目流程



步骤

服务内容

周期

Step1:蛋白检测前与预实验

SDS-PAGE检测蛋白情况;

小体积纯化与检测

1-2

 

Step2:蛋白纯化与检测

大量纯化;

SDS-PAGE

WB检测(视项目而定);

浓度检测

1-2

交付

纯化报告,图片数据;

成品蛋白

 

服务优势


设备一流,纯化方式多元化,适合不同来源的重组蛋白或天然蛋白;

专业技术团队为您量身定制最佳纯化方案;

提供全面的蛋白纯化分析报告;


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