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【新冠】核酸提取或纯化试剂

货号:CZ330

规格:10T/盒& 50T/盒&100T/盒

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实验原理本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的从全血、组织匀浆液、拭子,以及血 清、血浆、肺泡灌洗液等无细胞体液中提取DNA/RNA的方法。独特的缓冲体系使裂解液中的核酸高效特异地结合在磁珠上,获得的核酸纯度高,质量稳定,不含蛋白、核酸酶和其他杂质可适用于各种常规操作,包括PCR、荧光定量PCR等实验。具有在特定的盐离子浓度和pH值条件下,磁珠吸附RNADNA,当条件改变时,磁珠释放RNADNA,达到快速分离纯化RNADNA效果

主要组成成分

试剂盒组成

保存

CZ330-10

CZ330-50

CZ330-100

PBS溶液

室温

5mL/瓶×1

20mL/瓶×1

40 mL /瓶×1

磁珠悬浮液

2-8℃

110μl/×1

550μl×1

1.1mL×1

蛋白酶K

-20

300μl/支×1

1mL /支×2

2mL /瓶×1

洗液1(wash1)

室温

10mL/瓶×1

72 mL/瓶×1

72 mL/瓶×2

洗液2wash2

室温

6mL/瓶×1

24 mL/瓶×1

24mL/瓶×2

RNA酶水

室温

1mL/瓶×1

5mL /瓶×1

10mL /瓶×1

说明书

室温

1

1

1

另需要准备的试剂及注意事项

无水乙醇预冷的异丙醇(分析纯)。

磁珠初次使用时,必须剧烈摇晃1-2min,使磁珠分散。

不同批次试剂不可以混用。

储存条件及有效期

蛋白酶K: -20℃:长期保存,避免反复冻融,融化后4℃保存,并尽快使用;

磁珠悬浮液:2-8℃保存;

其它组分:室温保存。

适用仪器】磁力架或核酸提取仪

样品要求本试剂盒适用于从全血、组织匀浆液、拭子,以及血 清、血浆、肺泡灌洗液等无细胞体液中提取DNA/RNA的方法

 

使用方法

实验准备:

使用前,请按下表准确加入无水乙醇。

 成分

CZ330-10

CZ330-50

CZ330-100

洗液1wash1

10ml

72ml

72ml

无水乙醇

8ml

48ml

48ml

 

 成分

CZ330-10

CZ330-50

CZ330-100

洗液2wash2

6ml

24ml

24ml

乙醇

24ml

96ml

96ml

操作步骤

(磁力架)

1. 样品处理:

1.1 取1.5 mL离心管(自备),加入200 μL样本,20 μL蛋白酶K, 200 μLPBS溶液 300 μL异丙醇,涡旋震荡5秒后,置于室温,1200 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀10 分钟。

注:湿拭子样本咽拭子,及加了病毒保存液的样本),充分震荡混匀后取200 μL进行提取。干拭子样本浸泡于400 μL生理盐水中,充分震荡 混匀后静置5分钟,12,000 rpm离心1分钟后,取200 μL进行提取。

2. 向离心管中加入10 μL磁珠悬浮液,涡旋震荡10秒,置于室温,1200 rpm的恒温混匀 仪上震荡混匀5分钟。

3. 将离心管置于磁力架,磁珠完全吸附后,小心吸弃所有液体。

4. 将离心管小心从磁力架上取下,加入600 µl洗液1wash1使用前请检查是否已加入指定量的无水乙醇,涡旋混匀1min

5. 放置磁力架上磁吸60 sec,待磁珠完全吸附时小心移去液体。

6. 将离心管小心从磁力架上取下,加入600 µl洗液2wash2使用前请检查是否已加入指定量的无水乙醇,涡旋混匀1min

7. 放置磁力架上磁吸60 sec,待磁珠完全吸附时小心移去液体。

8. 离心管放置磁力架上,室温晾干1-2 min

9. 将离心管从磁力架上取下,加入20 µlRNA酶水,涡旋混匀,561200 rpm的恒温混匀仪上 震荡混匀5分钟。

10. 将离心管放置于磁力架上3min,待磁珠完全吸附时小心转移核酸溶液至新的无RNaseDNase离心管中,并保存-20℃或进入下一步实验。

(以核酸提取仪smart-32(达安基因股份有限公司)为例)

1.试剂分装至96孔板中。

按下表将准备好的试剂转移至对应的孔中(单位:μl


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12


异丙醇

洗液1

洗液1

洗液2

洗液2

RNA酶水

异丙醇

洗液1

洗液1

洗液2

洗液2

RNA酶水

A

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

B

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

C

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

D

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

E

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

F

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

G

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

H

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

2. 参考(磁力架)部分步骤(1.2.)处理样品,将处理好的样品,转移至对应孔17中。

3. 打开核酸提取仪的仓门,将准备好的样品板(注:已经加入试剂和样品的96孔板)放入提取内的卡槽中,插好搅拌套,关闭仓门,

4. 按照如下表,编辑、运行提取程序

步骤

槽位

名称

等待时间

min

混合时间

min

吸磁时间

sec

混合模式

体积

µl

温度状态

温度

℃)

1

1

裂解

0

10

0

5

500

加热

0

2

1

结合

0

5

180

5

500

关闭

0

3

2

洗涤1

0

1

90

8

600

关闭

0

4

3

洗涤1

0

1

90

8

600

关闭

0

5

4

洗涤2

0

1

90

8

600

关闭

0

6

5

洗涤2

0

1

90

8

600

关闭

0

7

6

洗脱

0.5

5

180

8

35

加热

65

8

1

弃磁珠

0

0.5

0

3

800

关闭

0

5. 程序运行完毕,转移孔612DNA/RNA至新的无RNaseDNase离心管,并保存-20℃或进入下一步实验。

检验方法的局限性】本试剂盒适用于全血、组织匀浆液、拭子,以及血 清、血浆、肺泡灌洗液等无细胞体液中提取DNA/RNA;标准情况下,纯化的DNAOD260/280比值在1.82.0之间。但是,当DNA浓度低于10 ng/μL时,偶尔发现该比值会偏离预期。 

【检验结果的判定】DNA纯度:OD260/OD280≈1.7~2.0 (>2.0,表明有RNA污染;<1.7,表明有蛋白质、酚等污染)。

注意事项

1. 洗液(wash1wash2)中含有易挥发成份,保存时确保瓶盖旋紧。

2. 裂解液(Buffer ABL)在低温下容易有晶体析出,请置于65水浴溶解。

3. 实验开始前,请清洁工作台,并进行消毒。

4. 试剂使用前应在常温下混匀。


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